Detección de adenovirus en pulmón humano por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) : relación con patología pulmonar crónica

Tesis de grado (Especialista en Medicina Interna) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Comisión de Estudios de Postgrado, 1997.

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En el presente trabajo se evaluó la presencia de genoma de adenovirus por la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), en células de pulmón humano de individuos sanos e individuos con patología pulmonar inflamatoria crónica (EPOC, asma, cáncer) y su posible relación en la patogénesis de dichas enfermedades. Se obtuvieron 29 muestras de pulmón procedentes de autopsias y biopsias de 22 pacientes (de algunas autopsias se obtuvieron muestras de pulmón derecho e izquierdo). A estas muestras de tejido se les aisló ADN total el cual fue utilizado como blanco de amplificación para la región E1a de adenovirus 2 y 5, usando el protocolo previamente descrito por Matsuse y col. 1995, utilizando como controles de amplificación positivos ADN obtenido de células Graham 293 y de un plásmido que contiene clonada la región E1, así como control interno de la amplificación un segmento de exon 10 del gen de la proteína de la conductancia de transmembrana (CFTR) y/o de B-globina humana. Las muestras de pulmón humano fueron procesadas por PCR sin conocimiento de la información clínica. El producto de 3 reacciones de PCR independientes, fue visualizado en geles de agarosa al 1 por ciento, y demostrada su especificidad por hibridación. Se detectó señal de amplificación en 9 pacientes que correspondían a 6 de 7 de aquellos con diagnóstico de EPOC, a 1 con tromboembolismo pulmonar, en 3 de 7 pacientes con infección respiratoria baja. De un total de 7 pacientes considerados sanos la reacción de PCR para dicha secuencia fue negativa. Los resultados de PCR señlan la presencia de genoma de adenovirus en pulmón en un 40,9 por ciento del total de muestras analizadas y su presencia en pacientes con EPOC fue estadísticamente significativa (p=0,006). La presencia de la región E1a responsable de la generación de proteínas requeridas para la replicación de virus, que pudiese persistir en células de pulmón humano en pacientes con EPOC, señala la importancia de evaluar a mayor escala la presencia de estas secuencias en forma letente en pulmón humano. Estudiar la expresión de estas regiones evaluando la participación de los productos de expresión de estas secuencias nucleotídicas-proteínas o ARN en pulmón permitirá entender la amplificación de estas secuencias en la patogénesis de EPOC(AU)