Mecanismos de transducción de señales asociados a la activación muscarínica del músculo liso de las vías aéreas

Tesis de grado (Doctor en Ciencias Fisiológicas mención Bioquímica) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Comisión de Estudios de Postgrado, sept. 2001.

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Se planteó como objetivo fundamental, determinar el tipo de guanil ciclasa (GC) involucrada en estas respuestas biológicas. Para ello utilizamos aproximaciones farmacológicas, como es el uso de los inhibidores específicos de dichas enzimas. Así utilizamos lonjas musculares aisladas del MLTB que fueron incubadasdurante 30 minutos con ODQ, un inhibidor específico de la guanilil ciclasa soluble (sGC) y con L-NAME, un inhibidor específico de la óxido nítrico sintetasa(NOS). EL ODQ (100 nM), inhibió completamente la primera señal, mientras que el L-NAME no fue capaz de bloquear ninguna de las dos señales de las dos señales del CMPc. Sin embargo, este inhibidor provocó el desplazamiento en 10 segundos en cuanto al tiempo de aparición de las señales y modificó la relación 2:1. Con el uso de anticuerpos específicos contra las NOS, se confirmó la presencia de la actividad de isoenzimas tipo NOS en nuestro modelo experimental. Estos resultados nos permiten concluir que la guanilciclasa responsable de la primera señal producida por estimulación muscarínica del MLTB, es una sGC, sensible a ODQ cuyo mecanismo de activación es a través de los mAChR, e involucra una vía no regulada por el óxido nítrico (NO). El segundo pico (60 seg) puede ser el producto de alguna GC particulada, posiblemente una GC dependiente de péptidos natriuréticos. Otro de los Objetivos propuesto en este trabajo, fue profundizar en los eventos moleculares asociados al efecto de antagonistas muscarínicos sobre los niveles de GMPc. Nosotros hemos demostrado que la atropina (antagonista no selectivo) incrementa los niveles de los nucleótidos cíclicos AMPc y GMPc de manera similar a un inhibidor "no selectivo" de las PDEs, como es el IBMX. Para definir el tipo de PDE asociada a este efecto, evaluamos el comportamiento de la atropina en presencia de inhibidores selectivos de las PDEs (Rolipram inhibidor de la PDE IV y Zaprinast inhibidor de la PDE V). En nuestro sistema biológico, encontramos que la atropina potencia el efecto de estos inhibidores específicos de las PDEs. Este comportamiento atípico, pudiera estar relacionado con la inhibición de alguna isoenzima de las PDEs, presente en el músculo liso. Adicionalmente, la atropina parece comportarse como un "agonista inverso" y teniendo en cuenta el perfil farmacológico evaluado utilizando antagonistas selectivos, esta respuesta está asociada a un mAChR del subtipo M2AChR en el MLTB(AU)