Purificación y caracterización de una fracción hemorrágica del veneno de la cascabel de uracoa (Crotalus vegrandis)

Tesis de grado (Magister Scientiarum en Bioanálisis mención Toxinología) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Comisión de Estudios de Postgrado. Area: Programa de Maestría y Doctorado Individualizado. Bioanálisis, sept. 2001.

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El objetivo del trabajo consistió en aislar la fracción con actividad hemorrágica y caracterizarla bioquímicamente. Por medio de dos métodos cromatográficos, intercambio iónico en una Mono Q2 y exclusión molecular en una columna de alta presión, se ha purificado de este veneno una fracción con actividad hemorrágica sobre piel y músculo de ratón. La fracción purificada se presentó, en geles de poliacrilamida y SDS en condiciones reductoras y teñida con la coloración de plata, como una sola banda de peso molecular 58000 daltons, indicando que que se trata de un polipéptido de cadena simple, la cual hemos denominado como Uracoima-1. La secuencia de aminoácidos de la región N-terminal de la cadena (20 residuos) fue determinada. La actividad proteolítica de Uracoima-1 fue ensayada sobre caseína y "hide powder azure". La inhibición de las actividades, hemorrágica y proteolítica con EDTA, EGTA y 1.10 phenantroline confirma la naturaleza de la proteína como una metaloproteínasa. Ella no fue inhibida por inhibidores de serinas proteínasas tales como PMSF y TCLK. El efecto de la temperatura y de pH sobre la actividad hemorrágica, demostró que era termolábil y su pH óptimo fue de 8.2. Esta proteína no coaguló el plasma y la actividad hidrolítica sobre el fibrinógeno fue dirigida preferencialmente sobre la cadena Aalfa, la cual fue digerida al minuto, la cadena Bbeta fue afectada a los 120 minutos, mientras que la cadena y permaneció inalterada. Uracoina-1 indujo miotoxicidad leve y no tiene actividad de fosfolipasa A2. Entre otras actividades ensayadas no presentó efectos letales, ni fibrinolíticos ni desfibrinantes in vivo. En conclusión se considera la primera toxina hemorrágica purificada y secuenciada de un crótalo suramericano, la cual vendría a ser un gran aporte al conocimiento en ésta área(AU)