Papel del receptor Fc en el proceso de infección por el virus de hepatitis C

Tesis de grado (Magister Scientiarum en Inmunología Básica) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Comisión de Estudios de Postgrado. Area: Maestría en Inmunología Básica, dic. 2000.

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En este estudio se evaluó el papel de los receptores Fc (RFc) en la infección de líneas celulares incubadas con crioprecipitados provenientes de individuos crónicamente infectados con el virus de hepatitis C (VHC). Los crioprecipitados fueron aislados a partir de muestras de suero mediante precipitación a 4øC y de acuerdo a protocolos ya descritos. La caracterización inmunoquímica de 23 muestras analizadas reveló niveles elevados tanto de proteínas como de inmunoglobulinas de tipo IgG en IgM en comparación con muestras de individuos controles sanos ( P 0.05). Así mismo, todas las muestras de los pacientes analizadas resultaron positivas para el ARN del VHC. Se establecieron las condiciones óptimas para la expresión de los receptores Fc (CD64, CD32 y CD16) en las líneas celulares U937 y Monomac6. Las células, previamente estimuladas con PMA e IFN-y, fueron incubadas durante 18 h a 37øC, 5 por ciento de CO2 con los crioprecipitados VHC(+) y luego con anti-IgG humana (Fab2) FITC. El análisis citofluorométrico mostró un porcentaje de positividad de 89,5 por ciento y 90,1 por ciento para las líneas celulares U937 y Monomac6 respectivamente lo que evidencia un proceso de interacción de los crioprecipitados con este tipo de células. A fin de bloquear los RFc, las células fueron incubadas con anticuerpos monoclonales dirigidos contra RFc de alta (CD64), intermedia (CD32) y baja (CD16) afinidad antes de la incubación con los crioprecipitados VHC(+). Los resultados muestran una inhibición en la unión de los crioprecipitados a las líneas celulares cuando se emplea una mezcla de anticuerpos monoclonales (CD64, CD32 y CD16) o el anticuerpo anti-CD32 de manera individual con una relación de intensidad media de fluorescencia entre células no-bloqueadas y bloqueadas de 11,9 y 4,02 para Monomac6 y U937 respectivamente. Simultáneamente se examinó la presencia de secuencias de ARN del VHC, con polaridad positiva y negativa, en las líneas celulares mediante RT-PCR. El análisis electroforético permitió identificar secuencias genómicas del VHC en aquellas células incubadas con los crioprecipitados VHC(+), mientras que las células tratadas previamente con los anticuerpos anti-RFc resultaron negativas. Así mismo, se identificaron secuencias de intermediarios replicativos del virus (ARN-) en la línea celular Monomac6 hasta 80 horas post-cultivo(AU)