Detección molecular de candidatus liberobacter en cítricas por medio de patrones de bandas RAPD / Maria de los A Castellano R ; tutor Salazar Efrain

Mecanografiado

Tesis de Grado (Ing. Agrónomo. Mención Fitotecnia) -- Universidad Central de Venezuela, Facultad de Agronomía, Escuela de Agronomía, Departamento de Genética, 2004

Incluye referencias bibliograficas

Este trabajo buscó determinar la presencia de Liberobacter asiaticum y Liberobacter africanum, la cual es transmitida por Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) y es causante de la enfermedad conocida como "Huanglongbing" que es un agente restrictivo en la producción de cítricas. Para identificar la bacteria se emplearon tres "primers" los cuales a través de la técnica de RAPD amplifican fragmentos de 662pb para L. africanum, 309pb para L. asiaticum con el "primer" OPP-03, una banda de 550pb con el "primer" OPA-17 y una de 1114pb con OPC-13 para L. africanum. Para la obtención de los fragmentos amplificados se usó como marcador de peso molecular ADN del fago lambda digerido con la enzima BsT E-II la cual reporta bandas desde 702 hasta 8.454pb. Se evaluaron 150 plantas de cítricas del Banco de germoplasma del INIA-CENIAP para realizar el diagnostico, utilizando ADN extraído de las nervaduras centrales, además se empleó como blanco positivo ADN de Catharanthus roseus infectado con L. asiaticum y un control negativo de C. roseus libre de la bacteria. Las plantas evaluadas no mostraron las bandas correspondientes a las dos bacterias con ninguno de los tres "primers" utilizados. Adicionalmente se realizaron unas pruebas para incrementar la certeza de la ausencia de las bacterias con los "primers" Forward-Reverse y LAB1-LAB2 de la región intergénica de los ARNr 16S y 23S los cuales son específicos para cada una de las bacterias, confirmándose de esta manera la ausencia de la enfermedad en las plantas analizadas. Se concluye, de manera general que a pesar de estar presente el vector del Huanglongbing en el país éste no ha transmitido la bacteria a las plantaciones de cítricas evaluadas, donde se ha encontrado presente el vector.

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