Estandarización de cultivos para la descripción e identificación de protozoarios de vida libre en estudios ecológicos / Karen Elena Bracale de Freitas ; tutor Roschman González

Mecanografiado

Tesis de grado (Lic. Biología).-- Universidad Central de Venezuela, Facultad de Ciencias, Escuela de Biología, 2016

Incluye referencias bibliográficas

La investigación y la caracterización de protozoarios de vida libre a menudo requieren un enfoque que difiere notablemente del aplicado en los estudios de metazoarios. De acuerdo con esto, para estudiar y cuantificar a estos microorganismos, se requiere redimensionar el uso de microtécnicas en función de los problemas técnicos y complicaciones que se producen en este tipo de investigaciones. En este sentido, la posibilidad de recrear estos microsistemas naturales en condiciones de laboratorio controladas, permitiría generar nuevos conocimientos que facilitarían la comprensión de estas microcomunidades y ayudaría a mejorar la descripción e identificación de protozoarios de vida libre a través del uso de técnicas de microscopia. Partiendo de las ideas expuestas anteriormente, este trabajo pretende estandarizar medios de cultivos que permitan el estudio eficiente de comunidades de protozoarios de vida libre a través de múltiples técnicas de microscopía. Para ello, se probaron 3 grupos de medios de cultivos de diferente composición: a. Medio con sales fosfatadas. b. Medio con sales fosfatadas enriquecidas con glucosa y c. Medio con sales inorgánicas. Cada uno de los medios fue sembrado con 2ml de agua proveniente de una fitotelmata de jardín (Bromelia sp). A partir de estos grupos experimentales de medios de cultivo, se monitoreo la abundancia de protozoarios con microscopia óptica y se determinó cuál de ellos proporcionaba la mayor abundancia de protozoarios de vida libre en condiciones de cultivo in vitro. Posteriormente, una vez establecido el medio de cultivo que promueve la mayor abundancia, se procedió a variar las condiciones fisicoquímicas del medio, tales como área, pH y temperatura. De igual forma que en el caso anterior, se monitoreo la abundancia de protozoarios con microscopia óptica, esto permitió determinar cuál de las condiciones de estudio proporcionaba la mayor abundancia de protozoarios de vida libre en condiciones de cultivo in vitro. Finalmente, fue tomado una muestra de 5μl del medio de cultivo con mayor abundancia de protozoarios previamente estandarizado y se fijó con 5μl de solución Karnovsky al 25% por 15 min y post-fijada con 5μl de solución Tetraóxido de Osmio al 1% por 15 min. Se tomó una muestra de 5μl de la mezcla, la cual se colocó en una rejilla de cobre cubierta con una película de nitrocelulosa y recubierta con una película de carbono. Posteriormente se observó en un microscopio electrónico de barrido, marca FEI Quanta 250 FEG en modo de observación de vacío bajo. A partir de lo observado en esta investigación, se establece que los medios de cultivos que presentaron una diferencia significativa (P<0.05) en la abundancia de protozoarios de vida libre, fueron los medios de cultivo del grupo experimental de sales inorgánicas (C). De igual forma, las condiciones abióticas que favorecieron significativamente (P<0.05) el desarrollo de estos microorganismos fueron las de mayor superficie de intercambio gaseoso, temperatura ambiente y pH fisiológico. Por otra parte, el registro fotográfico y micrográfico obtenido de las observaciones a estos microorganismos, permitieron concluir que el uso de múltiples técnicas y disciplinas como los medios de cultivos y la microscopía óptica y electrónica, permitieron estudiar de forma eficiente los sistemas de comunidades naturales en condiciones de laboratorio, manteniendo las características y la estructura de la comunidad invariantes. Palabras claves: protozoarios,microbiología, cultivos, medios.

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