La purificación, indentificación y caracterización de una fosfodiesterasa-1A asociada a membranas plasmáticas del músculo liso traqueal de bovino

Por: Colaborador(es): Tipo de material: TextoTextoIdioma: Español Detalles de publicación: Caracas, VE : s.n, feb. 2014.Descripción: 88 paginasOtro título:
  • The purification, identification and characterization of a phosphodiesterase-1A associated with plasma membranes of bovine tracheal smooth muscle
Tema(s): Premios:
Nota de disertación: Tesis de grado (Doctor en Ciencias Fisiológicas) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Coordinación de Estudios de Postgrado, feb. 2014. Resumen: La activación de receptores muscarínicos aumenta los niveles de AMPc/GMPc en el músculo liso traqueal de bovino mediante la inhibición de fosfodiesterasas, efecto similar fue producido por el isobutilmetilxantina (inhibidor no selectivo de PDEs) y la vinpocetina (inhibidor específico de PDE-1). El objetivo fue purificar y caracterizar a una PDE-1 dependiente de calcio y calmodulina (Ca2+CaM) e inhibida por vinpocetina, presente en las fracciones de membranas plasmáticas del MLTB, la PDE fue extraída de la membrana utilizando un amortiguador de baja fuerza iónica y luego purificada 38 veces utilizando dos columnas, (Q-sefarosa y CaM-agarosa), que fue inhibida por vinpocetina y estimulada por CaM, observándose mediante electroforesis dos bandas (56, 58 KDa) siendo identificada una PDE1A (58 KDa) por “Western blotting”. La PDE fue cuantificada utilizando [3H]GMPc y [3H]AMPc cuyos parámetros cinéticos fueron: Km (æM) para AMPc (8,4 ñ 0.67) y GMPc (6,1 ñ 1,49); Vmax (pmol/min./mg. de proteínas) para AMPc (99 ñ 3) y GMPc (66 Ý 5). La vinpocetina mostró IC50 (æM) para AMPc (4,9 ñ 0,20) y GMPc (4,6 ñ 0,30). La CaM estimuló dos veces la PDE-1A con un K(A) (nM) para AMPc (2,0 ñ 0,5) y GMPc (1,6 ñ 0,3); Vmax para AMPc (130 ñ 12) y GMPc (110 ñ Ý10). El Mg2+ mostró un K(A) (mM) para AMPc (0,3 ñ 0,02) y GMPc (0,2 ñ 0,01); Vmax para AMPc (99 Ý 3) y el GMPc (72 ñ 5). Se logró la purificación, identificación y caracterización de una PDE-1A sensible a vinpocetina y estimulada por Ca2+CaM en el MLTB(AU)
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Tesis en CD Tesis en CD Centro de Documentación "Dr. José Ángel Puchi Ferrer" E539.1 WE500 M423 2014 (Navegar estantería(Abre debajo)) Available

Ensayo Clínico

Tesis de grado (Doctor en Ciencias Fisiológicas) -- Universidad Central de Venezuela. Facultad de Medicina. Coordinación de Estudios de Postgrado, feb. 2014.

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La activación de receptores muscarínicos aumenta los niveles de AMPc/GMPc en el músculo liso traqueal de bovino mediante la inhibición de fosfodiesterasas, efecto similar fue producido por el isobutilmetilxantina (inhibidor no selectivo de PDEs) y la vinpocetina (inhibidor específico de PDE-1). El objetivo fue purificar y caracterizar a una PDE-1 dependiente de calcio y calmodulina (Ca2+CaM) e inhibida por vinpocetina, presente en las fracciones de membranas plasmáticas del MLTB, la PDE fue extraída de la membrana utilizando un amortiguador de baja fuerza iónica y luego purificada 38 veces utilizando dos columnas, (Q-sefarosa y CaM-agarosa), que fue inhibida por vinpocetina y estimulada por CaM, observándose mediante electroforesis dos bandas (56, 58 KDa) siendo identificada una PDE1A (58 KDa) por “Western blotting”. La PDE fue cuantificada utilizando [3H]GMPc y [3H]AMPc cuyos parámetros cinéticos fueron: Km (æM) para AMPc (8,4 ñ 0.67) y GMPc (6,1 ñ 1,49); Vmax (pmol/min./mg. de proteínas) para AMPc (99 ñ 3) y GMPc (66 Ý 5). La vinpocetina mostró IC50 (æM) para AMPc (4,9 ñ 0,20) y GMPc (4,6 ñ 0,30). La CaM estimuló dos veces la PDE-1A con un K(A) (nM) para AMPc (2,0 ñ 0,5) y GMPc (1,6 ñ 0,3); Vmax para AMPc (130 ñ 12) y GMPc (110 ñ Ý10). El Mg2+ mostró un K(A) (mM) para AMPc (0,3 ñ 0,02) y GMPc (0,2 ñ 0,01); Vmax para AMPc (99 Ý 3) y el GMPc (72 ñ 5). Se logró la purificación, identificación y caracterización de una PDE-1A sensible a vinpocetina y estimulada por Ca2+CaM en el MLTB(AU)

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